1. Хламидийные инфекции у собак.

Постановка диагноза на хламидиоз у собак не является обычным делом, возможно из-за того, что хламидий отказываются рассматривать как потенциальную причину болезни у этого вида животных. Однако, хламидии были причастны во множестве случаев к болезням собак (Shewen, 1980).

В первых сообщениях, хламидии были выделены из головного мозга собак с энцефалитом (Giroud и другие., 1954; Groulade и другие., 1954; Contini, 1956). У больных собак наблюдался синдром, похожий на чуму плотоядных. Это выглядело как системная инфекция с острым, подострым или хроническим течением, наиболее тяжело протекавшая у молодых собак. Наблюдались следующие клинические признаки: лихорадка, бронхопневмония, перитонит, отсутствие аппетита, рвота, диарея и поражения кожи. Наблюдалось повышение титра антител к хламидиям. Эта болезнь поддавалась лечению хлортетрациклином, которое, в дополнение к повышению титра хламидийных антител, отличало эту хламидийную болезнь от чумы плотоядных. Хламидии были так же выделены в случаях конъюнктивита у немецких овчарок и собак других пород (Voigt и другие., 1966; Скотт, 1968).

У собак были выделены антитела к возбудителю Chlamydophila psittaci (Fukushi и другие., 1985; Werth и другие., 1987). У 50 % собак клинически здоровых собак, у которых отсутствовали симптомы болезни, в сыворотке крови были обнаружены антитела к хламидиям (Terzin и Miskov, 1965), в то время как Popovici (1966) обнаружил антитела к хламидиям у собак, бывших в контакте с зараженными хламидиозом овцами. Kocianova и другие (1992) обнаружили, что почти 50 % сывороток крови от диких собак в Шри-Ланке содержали антитела к хламидиям. [Комментарий: Учитывая недостаточную специфичность серологических исследований на хламидиоз, значение всего этого неясно]. Sixl и другие (1988) обнаружили, что самая высокая распространенность антихламидийных антител наблюдается у домашних сторожевых собак, некоторых служебных собак и бродячих собак, хотя животные были в большинстве случаев клинически здоровы.

Случай вызванного хламидиями септического полиартрита у собаки был описан Lamrechts и другими (1999), при этом системная болезнь проявлялась лихорадкой, увеличением лимфатических узлов и артритами нескольких суставов. Хламидии неустановленных видов были обнаружены в синовиальной жидкости суставов. Происхождение инфекции было неизвестно, но это считали первым описанием случая хламидиозного артрита у собак.

Подобно людям, собаки могут иногда заражаться от птиц хламидиозом, становясь инфицированными, но редко передают инфекцию. Есть несколько сообщений, в которых описаны случаи заражения собак хламидиозом от птиц (Фрейзер и другие., 1969; Fukushi и другие., 1985; Krauss и другие., 1988). В случае, описанном Фрейзером, собака и несколько человек заразились хламидиозом от волнистых попугайчиков, которые умерли от хламидиоза в птичьем вольере. У собаки развились признаки поражения органов дыхания, и наблюдался высокий титр антител к хламидиям, и хламидии были выделены из кала двух других собак, контактировавших с ней. В другом сообщении, собака заразилась высоковирулентным штаммом хламидий от индейки (Arizmendi и другие., 1992). Хламидии были выделены из плевральной жидкости больного животного. Инфекция, вызванная Chlamydophila psittaci, была также обнаружена Krauss и другими (1988) в случае конъюнктивита у собаки.

Gresham и другие (1996) сообщили о том, что наблюдалась внутрисемейная вспышка хламидиоза, при этом заразились разные виды животных и люди. Три человека и две из трех собак заразились птичьим штаммом Chlamydophila psittaci спустя две - три недели после приобретения нового австралийского попугая. У птицы наблюдались умеренные истечения из глаз и носа, и ДНК возбудителя Chlamydophila psittaci была обнаружена с помощью полимеразной цепной реакции в образце фекалий. У людей наблюдалась тошнота, сонливость, судороги, лихорадка, головная боль, светобоязнь и галлюцинации. Один человек был болен в течение трех месяцев. У собак наблюдалась сильная дрожь, кашель, рвота, нарушения дыхания и лихорадка, а также небольшие истечения из носа и глаз. ДНК возбудителя Chlamydophila psittaci была обнаружена с помощью полимеразной цепной реакции у одной из больных собак. Людей и собак лечили антибиотиками, а австралийский попугай был убит, на том основании, что это представляло большой риск дальнейшего распространения инфекции. У одной из собак продолжали проявляться признаки хронического течения болезни, такие как сонливость и лихорадка, и эта собак была подвергнута повторному курсу лечения антибиотиками, после чего она выздоровела. Кошки и собаки, так же как птицы и сельскохозяйственные животные, являются потенциальными источниками заражения людей зоонозной хламидийной инфекцией (Эллиот и другие., 1985; Werth, 1989).

[Комментарий: Недостаток современных сообщений о хламидиозе собак, неуверенность относительно видов хламидий, прежде всего ответственных за инфекцию у собак и факт, что собаки являются животными-друзьями человека, вызывает потребность в проведении дальнейших исследований].

*******

2. Хламидиоз собак.

Этиология. Хламидиоз у собак вызывают возбудители видов Chlamydophila abortus и Chlamydophila psittaci. Один из штаммов вызывающих хламидиоз у собак – это КС-93.

Эпизоотология. Хламидиями заражено примерно 18-38 % собак (Обухов И.Л., Равилов Р.Х., Садриев А.Р.). Хламидии были выделены от собак, пасших неблагополучные по хламидиозу стада овец ещё в 1978 году. Источником возбудителя Ch. abortus для собак являются крупный рогатый скот, козы, овцы, реже собаки, лошади, зайцы, свиньи и морские свинки. Пути заражения собак Ch. abortus – часто половой и внутриутробный (вертикальный). У собак бывающих на пастбище – аэрозольный (аэрогенный). Собаки так же могут заразиться алиментарным путём при скармливании им боенских отходов неблагополучных по хламидиозу. Собаки заражаются Ch. psittaci аэрогенным (аэрозольным) путём. Никак нельзя исключить трансмиссивный путь заражения собак хламидиозом (через паразитиформных клещей, кровососущих насекомых). У собак чаще хламидий выделяют из органов абортированных плодов. Есть небольшое число сообщений о потенциальной возможности заражения хламидиозом человека от собак.

Клинические признаки. Инкубационный период при хламидиозе собак не определён. У большинства собак хламидиоз протекает бессимптомно в латентной или субклинической форме. Клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях. Есть данные, что генитальная форма хламидиоза у собак самая распространённая, она проявляется бесплодием, скрытыми и клинически выраженными абортами, рождением мёртвых и нежизнеспособных щенят. Аборты бывают во второй половине или конце щенности. Бывают случаи хламидиозного полиартрита у собак, при этом выражена лихорадка, увеличение лимфоузлов, одновременное поражение нескольких суставов. У собак хламидиозный конъюнктивит приводит к кератиту, нередко заканчивающемуся слепотой. Генерализованная форма хламидиоза у собак напоминает чуму плотоядных. Атеросклероз у собак бывает следствием хламидиоза, это доказано с помощью полимеразной цепной реакции.

Диагностика. Для диагностики хламидиоза у собак нужно использовать все доступные методы: эпизоотологические и клинические данные, данные вскрытия, микроскопию, РСК, РДСК, РИФ, ПИФ, ИФА, культуральный метод, полимеразную цепную реакцию, аллергическую пробу. Чаще всего используют иммуноферментный анализ и полимеразную цепную реакцию. Чувствительность ИФА – 2000 бактерий на пробу, чувствительность ПЦР в 15 раз больше, чем у культурального метода и составляет 10 бактерий на пробу.

Лечение. Основа лечения – этиотропная терапия. Есть случаи устойчивости хламидий к эритромицину, фторхинолонам и тетрациклинам, поэтому всегда необходимо определять чувствительность хламидий к антимикробным средствам на культурах клеток. Наиболее подходящие для лечения препараты – макролиды, тетрациклины и фторхинолоны. Препараты выбора – доксициклин и эритромицин. Менее активны, но и менее токсичны и дольше действуют спиромицин, азитромицин (сумамед), рокситромицин, вильпрафен (джозамицин), макропен (мидекамицин). Фторхинолоны уступают по активности макролидам и тетрациклинам, из фторхинолонов лучше применять байтрил (энрофлоксацин) и офлоксацин. Для лечения нельзя ни в коем случае применять пенициллины, это ведёт к персистенции хламидий. Вместе с антимикробными средствами для лечения хламидиоза надо применять иммуноактивные средства: тималин, тимоген, иммунофан, спленин, миелопид, циклоферон, ронколейкин и другие. Ронколейкин собакам применяют в дозе 10 тысяч МЕ на килограмм живой массы, 3-5 инъекций на курс лечения. Возможно проведение повторного курса через 3-4 недели после окончания первого. При хронических формах болезни можно применить для лечения инактивированную вакцину ХламиКон.

Профилактика. Для профилактики можно использовать инактивированную вакцину ХламиКон, из штаммов К-1 и С-1 возбудителя Ch. psittaci. Эта вакцина защищает 95,8 % собак на 1 год.

Возможностьзаражения человека.
Baker (1942) сообщил о большом количестве случаев атипичной пневмонии у людей (речь идёт о нетипичном протекании пневмонии, а не о болезни под названием "атипичная пневмония"), заразившихся от кошек, больных хламидиозом. Антитела к возбудителю "кошачьего пневмонита" были обнаружены в сыворотках крови у заразившихся людей. Позже, Schachter и другие (1969) описали у человека случай острого фолликулярного конъюнктивита, наблюдавшегося у владельца нескольких заражённых кошек. Хламидии были обнаружены у кошки и её владельца. Последний заболел вскоре после того, как у домашней кошки развился конъюнктивит и насморк. Хламидии, выделенные от человека использовались, чтобы экспериментально воспроизвести конъюнктивит у незаражённой кошки. По другим сообщениям, инфекция кошек, вызванная возбудителем Chlamydophila felis, может вызвать более генерализованную системную инфекцию у людей, включая эндокардит и гломерулонефрит (Реган и другие, 1978). Позже, было сообщено о случае хронического конъюнктивита у человека, вызванного возбудителем Chlamydophila felis.

Хламидии вида Chlamydophila felis, выделенные от человека и от представителей семейства кошачьих были идентичны (Хартлей и другие, 2001). Для того чтобы вылечить человека от этой хламидийной инфекции, необходим длительный курс лечения доксициклином.

Инфекция, вызванная возбудителем Chlamydophila felis, должна подозреваться у людей, если острый фолликулярный конъюнктивит или атипичная пневмония развивается через 1-3 недели после контакта с больными кошками. Вакцинация кошек против кошачьего хламидиоза уменьшает возможность заражения человека инфекцией, вызванной возбудителем Chlamydophila felis.

Разработанная нами иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у собак и кошек предназначена для диагностики хламидиоза у домашних плотоядных животных путем выполнения иммуноферментного анализа (ИФА) хламидийных антител в сыворотках крови собак и кошек. Она представляет собой набор реагентов, который включает в себя:

- иммуносорбент – планшет для иммунологических реакций, разборный, полистироловый для однократного применения, сорбированный специфическим хламидийным антигеном;

- положительный контрольный образец (Кс+) – сыворотка крови собаки, не разведенная, содержащая хламидийные антитела;

- положительный контрольный образец (Кк+) – сыворотка крови кошки, не разведенная, содержащая хламидийные антитела;

- отрицательный контрольный образец (К c -) – сыворотка крови собаки, не разведенная, не содержащая хламидийные антитела;

- отрицательный контрольный образец (Кк-) – сыворотка крови кошки, не разведенная, не содержащая хламидийные антитела;

- конъюгат – белок А, меченый пероксидазой хрена;

- фосфатно-солевой раствор с твином (ФСР-Т) – 25-кратный концентрат;

- цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБ) – раствор готовый к применению;

- хромоген – ортофенилендиамин (ОФД), таблетки белого или слегка желтоватого цвета по 2 мг;

- стоп-реагент – 4 N раствор серной кислоты.

Срок годности тест-системы 12 месяцев при соблюдении требований к применению и хранению Тест-систему хранят в закрытых помещениях в сухом и темном месте при температуре 4-8 0 С. Растворы и реагенты перед употреблением должны быть выдержаны не менее 30 минут при комнатной температуре.

Для проведения исследований готовят рабочий раствор ФСР-Т (содержимое флакона с 25-кратным концентратом ФСР-Т разводят дистиллированной водой до конечного объема 500 мл). Приготовленный раствор хранится не более 3 суток при температуре 4?С. Раствор используют для промывания планшетов и разведения конъюгата.

Содержимое 1 ампулы конъюгат растворяют в 100 мкл дистиллированной воды (концентрат). Концентрат конъюгата можно хранить при однократном замораживании (-16-18 0 С) в течение 30 дней. Для исследования сывороток кошек к 25 мкл концентрата конъюгата добавляют 1 мл ФСР-Т (рабочий раствор). Для исследования сывороток собак к 6 мкл концентрата конъюгата добавляют 1 мл ФСР-Т (рабочий раствор). Рабочие растворы конъюгата хранению не подлежат.

Для приготовления раствора субстрата непосредственно перед употреблением 3 таблетки ОФД растворяют в 10 мл цитратного буфера (ЦБ). Для работы на разборном планшете (на 16 лунок) 1 таблетку ОФД развести в 3,3 мл ЦБ. Раствор хранению не подлежит. Положительная и отрицательная контрольные сыворотки готовы к применению.

Для исследования можно использовать как свежеприготовленные сыворотки (плазмы), так и хранившиеся при 2-10?С в течение 48 часов, либо замороженные при минус 20?С в течение 3 месяцев. Сыворотка (плазма), содержащая осадок, может дать ложноположительный результат, поэтому перед анализом следует провести центрифугирование пробы при 5-10 тыс. об/мин в течение 10 минут.

Результаты ИФА можно регистрировать с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) смеси реагентов в лунках при длине волны 492 нм. «0» (бланк) устанавливают по воздуху. Результат подлежит учету, если среднее значение ОП отрицательных контролей (ОП ср. К-) не превышает 0,2 оптические единицы (о.е.), а среднее значение ОП положительных контролей (ОП ср. К+) составляет не менее 0,8 о.е. Положительными считаются образцы исследуемых сывороток, ОП которых превышает критическое значение ОП (ОП крит.), которое рассчитывается по формуле: ОП крит.= ОП ср. К- + 0,2.

Кроме того, результаты ИФА можно регистрировать и визуально по интенсивности окрашивания цветной реакции ферментзависимой метки с субстратом. Положительными считаются образцы, интенсивность окрашивания которых в лунках с исследуемой сывороткой отчетливо отличаются от таковой в отрицательном контроле. Интенсивность окрашивания положительного контроля при этом должна быть достаточно выраженной.

Разработанная нами иммуноферментная тест-система для диагностики хламидиоза у собак и кошек показала свою эффективность по сравнению с РСК и может быть внедрена в ветеринарную практику. Наставление по ее применению утверждено 18 марта 2002г начальником ГУВ Кабмина РТ.

Р.Х. Хамадеев, Р.Х. Равилов, Н.В. Шамсутдинова
В.В. Герасимов, Л.В. Королева
Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт
Казанская государственная академия ветеринарной медицины
Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИД (г. Казань)
Республиканская ветеринарная лаборатория